Контроль якості в ЛТІ та розбіжності за ABO
СОП внутрішньолабораторного контролю якості реагентів та алгоритм вирішення розбіжностей при перехресному типуванні (ISO 15189 / EDQM)
🧪 Імуногематологія та Контроль якості
📋 1. СОП щоденного внутрішнього контролю якості реагентів (ВЛКК)
Щоранку до початку виконання клінічних досліджень лаборант ЛТІ зобов’язаний провести перевірку реагентів із обов’язковою реєстрацією результатів у Журналі ВЛКК.
| Тип реагенту | Параметри перевірки | Методика та контрольні зразки | Критерії прийнятності |
|---|---|---|---|
|
Моноклональні реагенти (Цоліклони) Anti-A, Anti-B, Anti-AB, Anti-D |
• Зовнішній вигляд / прозорість • Специфічність • Авідність (час появи аглютинації) • Сила реакції (інтенсивність) |
Тестування з відомими стандартними еритроцитами: • Позитивний контроль (hetero/homozygous) • Негативний контроль (відсутній антиген) |
• Відсутність осаду, пластівців чи гемолізу. • Початок аглютинації < 10 секунд. • Сила реакції 4+ з позитивним контролем, 0 (негативно) з негативним. |
|
Стандартні еритроцити A₁, A₂, B, O (2–5% суспензія) |
• Відсутність автогемолізу • Специфічність аглютинації • Стерильність та прозорість надсадочної рідини |
Тестування з відомою моноклональною або поліклональною сироваткою відповідної специфічності. |
• Надсадочна рідина без ознак гемолізу. • Вичітка та чітка аглютинація 3+ / 4+ із відповідним цоліклоном. • Термін придатності не порушено. |
|
Гелеві карти / Колоночні системи ABO/Rh, IH-Cards, Coombs |
• Цілісність мембрани та фольги • Рівень гелю та рідини над гелем • Відсутність бульбашок та висихання |
Візуальний огляд кожної карти та щоденний тест із контрольною панеллю еритроцитів. |
• Гелевий стовпчик без тріщин та бульбашок. • Наявність прозорого рідкого шару над гелем. • Чітке розділення: чітка смуга на поверхні (4+) або щільний осад на дні (0). |
Правило зупинки при збої ВЛКК
Якщо хоча б один реагент не пройшов контроль якості (слабка аглютинація, хибнопозитивна реакція), виконання клінічних досліджень цим флаконом/серією негайно припиняється. Флакон бракується, вилучається та складається Акт про брак.
Зовнішнє оцінювання якості (ЗОЯ / EQA)
ЛТІ повинна брати участь у програмах зовнішнього міжлабораторного порівняльного тестування (професійне тестування) щонайменше 2–4 рази на рік для підтвердження компетентності за ISO 15189.
🧩 2. Алгоритм розв'язання розбіжностей при визначенні групи крові за ABO
Розбіжність ABO (ABO Discrepancy) виникає у випадках, коли результати прямого типування (реакція еритроцитів з цоліклонами) не співпадають із результатами зворотного типування (реакція сироватки зі стандартними еритроцитами).
🔍 2.1. Класифікація причин розбіжностей та діагностика
| Тип розбіжності | Характерний лабораторний профіль | Етіологія / Основні причини | Шляхи вирішення та підтвердження |
|---|---|---|---|
|
Група I: Слабкі або відсутні антитіла у сироватці Зворотне типування |
Зворотне типування дає слабку (1+) або негативну (0) реакцію там, де очікується аглютинація. |
• Новонароджені (до 4–6 місяців) • Похилий вік (зниження титру) • Гіпогаммаглобулінемія, імунодефіцити, ХЛЛ, прийом імунодепресантів. |
Інкубація сироватки зі стандартними еритроцитами при +4 °C протягом 15–30 хвилин (з автоконтролем). Збільшення співвідношення сироватка:еритроцити (4 краплі : 1 крапля). |
|
Група II: Слабкі або атипові антигени на еритроцитах Пряме типування |
Пряме типування показує слабку або відсутню реакцію з Anti-A або Anti-B. |
• Слабкі підгрупи: A₂, A₃, Aₓ, Aₘ, B₃ • Ослаблення антигенів при лейкозах, мієлодисплазіях • Набутий антиген B ("Acquired B"). |
Використання анти-A₁, Anti-H (лектинів Ulex europaeus), гелевих карт підвищеної чутливості, адсорбція-елюція антитіл. |
|
Група III: Протеїнові аномалії та «Псевдоаглютинація» Плазмові фактори |
Неспецифічна позитивна реакція у прямому та зворотному типуванні. Утворення "монетних стовпчиків" (Rouleaux). |
• Диспротеїнемія, множинна мієлома, макроглобулінемія Вальденстрема • Застосування плазмозамінників (декстрани, інфукол). |
Метод відмивання: Потрійне відмивання еритроцитів 0.9% NaCl перед прямою реакцією. Тест заміщення саліном (Saline Replacement Technique) для сироватки. |
|
Група IV: Додаткові / Несподівані антитіла Атипові антитіла |
Неочікувана аглютинація у зворотному типуванні або в пробі з еритроцитами O(I). |
• Наявність екстрааглютинінів α₁ (анти-A₁) у осіб з A₂ або A₂B • Холодові аутоантитіла (анти-I, анти-i) • Холодові алоантитіла (анти-M, анти-N, анти-P₁). |
Скринінг антитіл при кімнатній температурі та 37 °C. Використання панелі еритроцитів O(I), підбір A₂-еритроцитів, зігрівання реакційної суміші до 37 °C. |
|
Група V: Подвійні популяції / Хімеризм Змішане поле |
Реакція "змішаного поля" (Mixed Field Reaction): прозоре середовище з дрібними аглютинатами на тлі неаглютинованих еритроцитів. |
• Нещодавня масивна трансфузія O(I) еритроцитів реципієнту A, B або AB • Трансплантація кісткового мозку/ГСК з розбіжністю за ABO • Постійний кров'яний хімеризм (близнюки). |
Збір детального трансфузійного анамнезу та анамнезу трансплантації. Мікроскопічна оцінка аглютинації, гелева технологія. |
🛣️ 2.2. Покроковий алгоритм розслідування розбіжностей ABO біля столу
Крок 1: Виключення технічних помилок
Перевірити маркування пробірок, терміни придатності реагентів. Повторити дослідження з того ж зразка та взяти свіжу порцію крові пацієнта. Ретельно відмити еритроцити 3 рази в 0.9% NaCl.
Крок 2: Збір клінічного анамнезу
Уточнити вік пацієнта, діагноз (мієлома, лейкоз), трансфузійний анамнез за останні 3 місяці, факти трансплантації та прийом ліків (декстрани, антибіотики).
Крок 3: Розширене лабораторне тестування
Провести тестування з додатковими реагентами: Анти-A₁ (лектин Dolichos biflorus), Anti-H (лектин Ulex europaeus), додаткові панелі стандартних еритроцитів A₁, A₂, B, O.
Крок 4: Температурні та салінові проби
При підозрі на холодові антитіла провести проби при 37 °C та +4 °C. При підозрі на "монетні стовпчики" провести тест заміни саліном.
🚨 Золоте правило трансфузійної безпеки при розбіжностях ABO:
Якщо розбіжність за ABO не вдається швидко розв'язати, а пацієнт потребує термінової трансфузії — видаються тільки відмиті еритроцити O (I) Rh(D)-негативні та СЗП/тромбоцити групи AB (IV)!
Якщо розбіжність за ABO не вдається швидко розв'язати, а пацієнт потребує термінової трансфузії — видаються тільки відмиті еритроцити O (I) Rh(D)-негативні та СЗП/тромбоцити групи AB (IV)!
• Еритроцити: O (I) Rh-негативні
• Плазма: AB (IV)
• Плазма: AB (IV)
🌐 Міжнародні ресурси та керівництва з імуногематології
Стандарт ISO 15189 (Розділ 5.6)
Міжнародні вимоги до забезпечення якості вимірювань, валідації методів та контрольних матеріалів в імуногематології.
AABB Technical Manual (ABO Discrepancies)
Керівництво Американської асоціації банків крові: Детальний алгоритм диференціальної діагностики підгруп ABO та атипових антитіл.
🔗 Офіційні джерела та міжнародні сайти:
ISBT — Immunobiology Working Party
Матеріали та номенклатура рідкісних підгруп ABO і нових еритроцитарних антигенів.
AABB Guidelines & Standards
Стандарти внутрішнього та зовнішнього контролю якості імуногематологічних досліджень.
EDQM Blood Guide (Council of Europe)
Вимоги до контролю якості цоліклонів, гелевих систем та стандартних еритроцитів.
BSH Transfusion Guidelines
Британські клінічні настанови з вирішення імуногематологічних складних кейсів та вибору компонентів.